رنگ آمیزی اسید - فست

پل ارلیش رنگ آمیزی اسید – فست را در سال 1882، به هنگام بررسی عامل بیماری سل (مایکوباکتریوم توبرکلوزیس) ابداع کرد. برخی از باکتری ها وقتی با کربول فوشین غلیظ همراه با حرارت رنگ آمیزی شوند و بعد برای رنگ بری در تأثیر اسیدهای قوی قرار گیرند رنگ خود را از دست نمی دهند و در برابر اسیدها مقاومند (اسید – فست هستند). این پدیده اساس رنگ آمیزی اسید – فاست است که برای رنگ آمیزی باکتری های خانواده مایکوباکتریوم ها از جمله مایکوباکتریوم توبرکلوزیس بکار می رود. در این روش ابتدا گسترش را تحت تأثیر کربول فوشین غلیظ و حرارت قرار می دهند سپس با اسید رنگ بری را انجام می دهند و پس از شستشو، لام را آبی متیلن رنگ آمیزی می نمایند. در این صورت کلیه باکتری ها به رنگ آبی در می آیند. به استثناء مایکوباکتریوم ها که اسید – فست بوده و رنگ قرمز مربوط به کربول فوشین را حفظ می کند. مقاومت در برابر در باکتری ها مربوط به وجود مواد چربی و موم موجود در دیواره است.

مایکوباکتریوم توبرکلوزیس نه تنها در مقابل است بلکه در مقابل الکل هم، مقاوم است. زمانی که در نمونه های آزمایشگی (خلط و ادرار) رنگ آمیزی را انجام می دهیم باید لام ها را با اسید و الکل رنگ بری کنیم چرا که با این مایکوباکتریوم های ساپروفیت (همچون مایکوباکتریوم سمگماتیس) که در مقابل الکل مقاوم نیستند باعث اشتباه نشوند.

روش آزمایش (ذیل نلسون)

1. با رعایت شرایط سترون، گسترشی مخلوط ار کایکوباکتریوم اسمگماتیس و استافیلوکوس اپیدرمیدیس تهیه نموده، پس از خشک شدن با حرارت آن را ثابت نمایید.

2. گسترش را با کربول فوشین بپوشانید و به مدت 5 دقیقه روی حمام آب جوش،حرارت دهید.

3. ابتدا رنگ را از روی لام دور ریخته با آب شستشو دهید و با اسید سولفوریک 5 درصد رنگ بری نمایید.

4. لام را با آب شسته و با آبی متیلن به مدت 30 ثانیه گسترش را بپوشانید.

5. لام را دوباره با آب بشویید.

6. لام را به آرامی و به دقت با کاغذ خشک کن خشک کنید و یا به صورت مورب قرار داده و صبر کنید تا خشک شود.

7. با عدسی 100 میکروسکوپ و روغن ایمرسیون مشاهده نمایید.

* باکتری های اسید – فست قرمز رنگ و سایر باتری ها به رنگ آبی مشاهده می شوند.

* این رنگ آمیزی برای شناسایی و بررسی بیماری هایی که توسط باکتری های اسید – فست همچون بیماری سل (مایکوباکتریوم توبرکلوزیس) و بیماری جذام (مایکوباکتریوم لپره) ایجاد می شوند، مورد اتژستفاده قرار م گیرند.

* برخی از گونه های جنس نوکاردیا اسید – فست نسبی هستند.

* اسپور باکتری ها در رنگ آمیزی اسید – فست به رنگ قرمز مشاهده می شود.