رنگ آمیزی ساده

همانطور که ذکر شد در رنگ آمیزی ساده کلیه قسمت های باکتری یکسان رنگ آمیزی می شوند که برای مشاهده ی شکل و اندازه میکروب ها بکار می رود. در این نوع رنگ آمیزی از یک نوع رنگ استفاده می شود و آن هم اغلب از انواع رنگ های قلیایی است که منجر به رنگ شدن باکتری می گردد. رنگ باکتری با توجه به رنگ به کار رفته متفاوت است به طور مثال در صورتی که از رنگ آبی متیلن استفاده شود باکتری به رنگ آبی مشاهده خواهد شد و اگر از رنگ های فوشین و سافرانین استفاده شود باکتری به رنگ قرمز نمایان خواهد شد.

شایان ذکر است که در این نوع رنگ آمیزی، اسپور و دانه های چربی رنگ نخواهند شد و به صورت شفاف مشاهده خواهند شد. این امر به دلیل ساختمان سخت اسپور و ماهیت دانه های چربی است که نحوه ی رنگ آمیزی آنها در آزمایش بعدی توضیح داده خواهد شد.

روش آزمایش:

1. ابتدا به گسترش از باکتری های استافیلوکوکوس، اشرشیاکلی و باسیلوس سوبتیلیس روی سه لام مختلف تهیه نمایید.

2. پس از خشک شدن گسترش ها، آن را با حرارت ثابت نمایید.

3. گسترش ها را با محلول رنگی آبی متیلن به مدت یک دقیقه بپوشانید.

4. با آب شستشو دهید و صبر کنید تا لام خشک شود.

5. با عدسی 100 و روغن ایمرسیون مشاهده کنید.

توجه: در رنگ آمیزی فوق بجای محلول رنگی آبی متیلن می توانید از محلول های دیگری همچون سافرانین یا فوشین نیز استفاده نمایید.

رنگ آمیزی منفی

در این روش، از رنگی ساده که باکتری ها را رنگ ننموده و تن ها زمینه لام را رنگ می کند استفاده می شود. یعنی زیر میکروسکوپ زمینه ی لام رنگی و باکتری ها به صورت اجسامی شفاف در این زمینه، مشاهده می شوند. مزیت این روش نسبت به روش های دیگر این است که، شکل میکروب ها در اثر اضافه شدن رنگ ها تغییر نمی کند ضمن آن را که میکروارگانیسم های مورد مطالعه به اندازه طبیعی خود دیده می شوند. رنگ هایی که خاصیتی این گونه رنگ سیاه هستند و باعث تیره شدن زمینه ی لام می شوند و قرمز کنگو نیز باعث قرمز شدن زمینه می گردد که در اثر افزودن اسید می تواند به رنگ آبی نیز مشاهده شود.

الف- روش آزمایش (نیگروزین)

1. ابتدا قطره ی کوچکی از نگروزین را روی لام تمیز و خشک قرار دهید.

2. با فیلروپلاتین مقدار کمی از پرگنه استافیلوکوکوس را برداشت نموده و در قطره نگروزین حل نموده گسترش تهیه کنید.

3. صبر کنید تا گسترش خشک شود.

4. با عدسی 100 و روغن ایمرسیون مشاهده نموده و در گزارش کار خود ترسیم نمایید.

تذکر 1: آزمایش فوق را با پرگنه با سیلوس سوبتیلیس و کلبسیلا نیز انجام دهید.

تذکر 2: می توانید به جای نگروزین از مرکب چین استفاده نمایید.

تذکر 3: برای بررسی و مشاهده ی جرم های دندان می توانید با استفاده از یک خلال دندان، سطح و شکاف بین دندان ها را تراشیده و از رسوب به دست آمده و نگروزین، گسترش تهیه نمایید.

ب – روش آزمایش (قرمز کنگو یا روژ دو کنگو)

1. ابتدا قطره ای از قرمز کنگو را روی لام تمیز و خشک قرار دهید.

2. با فیلدوپلاتین مقدار کمی از پرگنه های باکتری های فوق را برداشت نموده در قطره ی قرمز کنگو حل نموده گسترش تهیه کنید.

3. صبر کنید تا گسترش خشک شود.

4. روی لام محلول 1٪ اسید کلریدریک در الکل بریزید سپس لام را سرازیر کنید و بدون اینکه لام را شستشو دهید صبر کنید تا لام خشک شود.

5. با عدسی 100 و روغن ایمرسیون مشاهده کنید و مشاهدات خود را در گزارش کارتان ترسیم نمایید.