هدف آزمايش:آشنايي با چگونگي تعیین انواع گروه هاي خونی و RH

وسایل آزمايش:

1.لام

2. آنتی کرهای (D-B-A)

3.لانست

4. الکل

5. پنبه

6. قطره چکان

عنوان آزمايش :استخراج DNAاز پياز

هدف آزمايش:آشنايي با ساختارفيزيكي DNA

وسايل آزمايش:

1.بشر

2. لوله آزمايش

3.نمك

4.مايع ظرفشويي

5.پياز

6.رنده

7.كارد

8. صافي

شرح آزمايش:

تقريبا 200 ميلي ليتر آب را در يك بشر 400 ميلي ليتري 50 تا  60 درجه حرارت دهيد. مقداري يخ تهيه كرده و يك حمام آب – يخ درست كنيد.

10 ميلي ليتر مايع ظرفشوئي(بدون رنگ و شفاف) به 100 ميلي ليتر آب مقطر اضافه كنيد و با نوك يك اسپاتول نمك به محلول اضافه نمائيد.آهسته محلول را به هم بزنيد(تا حباب تشكيل نشود) تا نمك حل شود.با يك كارد پياز ها را نصف كنيد بهتر است تكه هاي پياز بزرگ باشند تا كوچک.و پيازها را با 100 ميلي ليتر محلول دترجنت-نمك بپوشانيد.محلول پياز حاصل را به مدت 10 تا 12 دقيقه در داخل حمام آب داغ قرار دهيد.حرارت دادن بيش از 15 دقيقه طول نكشد زيرا ملكول هاي دي ان آ شروع به شكستن مي كنند.در اين مدت با پشت قاشق  پياز ها را فشار دهيد.سپس  محلول را به مدت 5 دقيقه در حمام آب سرد قرار دهيد و در اين مدت با پشت قاشق محلول را فشار دهيد.محلول را از يك صافي قهوه يا صافي كاغذي عبور دهيد.اجازه دهيد نيروي جاذبه كار صافي كردن را انجام دهد.اين عمل ممكن است چندين دقيقه بطول بيانجامد.5 ميلي ليتر از محلول صاف شده را به داخل يك لوله آزمايش منتقل كنيد.لوله آزمايش را خم كنيد و با يك پيپت پاستور يا قطره چكان الكل سرد را از روي ديواره لوله وارد لوله كنيدو لايه اي حدود 1 سانتي متر در رو تشكيل دهد.لوله را 2 تا  3 دقيقه بدون حركت نگاه داريد.مشاهده مي كنيد رشته اي دي ان آ در الكل سرد رسوب مي كند .رشته هاي دي ان آ در بين لايه الكل و محلول پياز مي باشد.با يك قلاب فلزي و يا چيز مشابه مي توانيد رشته هاي دي ان آ را از سطح جدا كننده بين الكل و محلول پياز برداريد.دتر جنت باعث شكسته شدن غشاء سلول و خروج دي ان آ و ورود آن به داخل محلول مي گردد.دي ان آ شبيه مخاط سفيد رنگي مي باشند.

روش هاي مختلفي براي استخراج DNA  از ميوه ها و پياز ارائه شده اند كه دلايل زير براي اعمالي كه در اين روشهاي مختلف انجام مي شود ذكر مي گردد:

1-چليت كردن كاتيون هاي دو ظرفيتي مانند Ca2+, Mg2+  به وسيله نمك براي متوقف كردن اعمال آنزيم تجزيه كنندهDNA (دي ان آزDNase-) همچنين نمك مي تواند انتهاهاي  فسفات DNA  را به هم نزديك كند

و در نتيجه رسوب آن را آسانتر نمايد.

2- خرد كردن سلول ها به وسيله رنده كردن

3- ازبين بردن ليپيدهاي غشاء به وسيله اضافه كردن دترجنت و در نتيجه شكسته شدن غشاء

4-از بين بردن پروتئين هاي سلول و هيستون ها ي متصل به DNA  به وسيله اضافه كردن يك پروتئاز و يا ته نشين كردن آنها  با استات سديم يا آمونيوم  و يا نمك آشپزخانه

5-رسوب DNA در اتانول يا ايزوپروپانول سرد زيرا DNA در الكل نامحلول است اما در آب محلول است به هم مي چسبند و اين مرحله همچنين نمك را خارج مي كند.

6-حرارت دادن(50 تا 60 درجه سانتي گراد) نه تنها به شكستن سلول ها كمك مي كند بلكه باعث غير فعال شدن آنزيم هاي DNaseنيز مي شود البته حرارت دادن اگر زياد طول بكشد خود DNA را نيزتجزيه مي كند. به همين علت در روشهائي كه از حرارت استفاده مي شود بايستي حد اكثر 12 دقيقه عصاره را در حمام آب گرم قرار داد و سپس بلافاصله جهت جلوگيري از انهدام DNA عصاره را در حمام آب سرد-يخ به مدت15 -5 دقيقه قرار داد.

7-كج نگاه داشتن لوله و سپس اضافه كردن الكل سرد مانع از مخلوط شدن عصاره و الكل مي گرددو در نتيجه دو فاز تشكيل مي گردد.

منبع:گروه آموزشی زیست شناسی استان کرمان